Phân Biệt Các Kĩ Thuật Xét Nghiệm Pcr: Rt

--- Bài mới hơn ---

  • Hô Biến Pcr Thành Real
  • Sự Khác Nhau Giữa Công Chức Và Viên Chức?
  • Cấu While, Meanwhile, Meantime: Công Thức, Sự Khác Biệt Và Bài Tập
  • Phân Biệt During Và Through
  • Cách Dùng Và Phân Biệt “During” Và “Through”
  • PCR (hay là phản ứng tổng hợp chuỗi polymerase) là một kĩ thuật hiện đại, được ứng dụng rộng rãi trong Y khoa, như trong chuẩn đoán bệnh di truyền, bệnh do vi khuẩn, virus, ADN “dấu vân tay”, xác định huyết thống…

    Nguyên lý hoạt động của PCR là tạo ra một lượng lớn các bản sao ADN từ một đoạn ADN chọn lọc, ở môi trường in vitro tương tự như trong quá trình phân bào, trong một thời gian ngắn. Lượng lớn ADN tạo thành được so sánh, đối chiếu với các mẫu chuẩn tại các ngân hàng dữ liệu ADN, các thông số, các đặc điểm chuẩn đã có sẵn để đưa ra kết quả.

    Vậy, trong trường hợp vật chất di truyền không phải là ADN thì sao? Với những virus có vật chất di truyền là ARN, liệu có sử dụng được PRC không?

    Để hiểu rõ vấn đề này chúng ta cần phân biệt được 2 kiểu phản ứng PCR: 

    • Phản ứng tổng hợp chuỗi polymerase thời gian thực

      (

      Real-time PCR

      )

      , còn gọi là qPCR.

    • Phản ứng tổng hợp chuỗi polymerase sao chép ngược (

      Reverse transcription PCR

      ), gọi tắt là RT-PCR

    qPCR là quá trình khuếch đại (sao chép) một đoạn ADN xác định lên hàng trăm nghìn lần, đủ để phân tích. Trước đó, các mẫu xét nghiệm được xử lý bằng hóa chất để  tách chiết ADN từ mẫu đó.

    qPCR, ngoài là “PCR định lượng”, còn có nhiều các ứng dụng khác, tiêu biểu như:

    • Phát hiện gene mục tiêu (Định tính). Kết quả có thể là Âm/Dương 

    • Xác định kiểu gene (genotype, týp) của gene mục tiêu. Kết quả trả ra là genotype A, B, C, v.v…, 

    Một số phản ứng khuếch đại ADN có bản chất là PCR, chúng đẳng nhiệt, nghĩa là chúng chạy ở một nhiệt độ không đổi. Và tiêu biểu nhất là khuếch đại phụ thuộc vào enzyme Helicase – một loại enzyme tháo xoắn – tương tự như PCR truyền thống, nhưng sử dụng nhiệt độ không đổi thay vì qua các bước tách chuỗi đôi ADN và phối hợp/mở rộng chuỗi bởi biến đổi nhiệt.

    Hai phương pháp phổ biến để phát hiện các sản phẩm trong qPCR là sử dụng:

    • Thuốc nhuộm huỳnh quang không đặc hiệu xen kẽ với bất kỳ ADN sợi kép.

    • Đầu dò đặc hiệu gồm oligonucleotide được dán nhãn bằng máy phóng 

      huỳnh quang

      .

    RT-PCR hiểu đơn giản là: đầu tiên cần sử dụng quá trình phiên mã ngược (tức chuyển ARN thành ADN lấy từ mẫu virus hay vi khuẩn có vật chất di truyền là ARN) để thu được ADN, sau đó dùng qPCR để khuếch đại ADN đó, đủ để phân tích. Quy trình RT-PCR thường cần khoảng 3h hoặc hơn.

    Hình 1. RT-PCR và qPCR

    RT-PCR có thể được tiến hành theo phương thức một bước và hai bước.

    * RT-qPCR một bước, giai đoạn tổng hợp ADN (phiên mã ngược) và qPCR được tiến hành trong cùng một ống phản ứng bằng cùng một enzym. Phương thức này chỉ có thể sử dụng mồi đặc hiệu.

    * RT-qPCR hai bước, giai đoạn tổng hợp ADN và qPCR được tiến hành trong hai ống phản ứng riêng biệt với enzym, đệm, thành phần và điều kiện phản ứng được tối ưu cho mỗi giai đoạn.

    Hình 2. Sao chép ngược (RT-PCR) và tổng hợp ADN (qPCR)

    Khuôn của RT-PCR là ARN, ARN này có thể nằm trong hỗn hợp ARN tổng số hoặc chỉ riêng mARN. Tách chiết ARN tổng số cần ít bước thực hiện hơn, giúp cho hiệu suất tách chiết cao hơn đồng thời thuận lợi hơn khi định mức lượng tế bào đầu vào. Ngoài ra, do không có bước làm giàu riêng mARN, sử dụng ARN tổng số không gây khác biệt trong hiệu suất tách chiết các loại mARN khác nhau. Những ưu thế trên đã giúp cho ARN tổng số được ưu tiên chọn làm vật liệu khởi đầu phù hợp cho RT-PCR hơn là mARN tinh sạch chỉ giúp phản ứng có độ nhạy cao hơn một chút.

    Hình 3. Một số loại mồi dùng trong RT-PCR.

    Mồi (Primer) phổ biến hay dùng trong RT-PCR là oligo dT và mồi ngẫu nhiên, nó sẽ liên kết bổ sung với khuôn ARN và làm điểm bắt đầu cho phản ứng tổng hợp ADN.

    Enzym phiên mã ngược tiến hành phản ứng tổng hợp ADNc từ khuôn ARN. Một số enzym có hoạt tính RNAse cho phép phân hủy khuôn ARN sau khi đã tổng hợp ADN. Nếu enzym không có hoạt tính này, có thể cần bổ sung RNAse nhằm tăng hiệu quả của qPCR.

    Loại enzym phiên mã ngược thường dùng là enzym phiên mã ngược của virus ung thư bạch cầu chuột moloney (M-MLV) và virus cúm gia cầm (AMV). Tiêu chuẩn của một enzym phiên mã ngược lý tưởng cho phản ứng RT-PCR là có độ bền nhiệt tốt, cho phép tổng hợp hiệu quả ADN ở nhiệt độ cao trên những khuôn ARN có nhiều vùng cấu trúc bậc hai.

    Cặp mồi lý tưởng cho phản ứng qPCR trong RT-PCR thường được thiết kế nằm trùm qua vị trí nối giữa hai exon. Một trong hai mồi sẽ nằm vắt ngang vị trí nối giữa 2 exon này, khiến cho mồi chỉ bắt cặp đặc hiệu với ADN mà không thể liên kết với ADN tổng số do ở ADN tổng số chứa intron nằm xen giữa các exon. Thiết kế này giúp loại bỏ nguy cơ khuếch đại nhầm ADN tổng số.

    Nếu không thể thiết kế mồi chùm qua vị trí nối giữa exon hoặc nằm trên 2 exon được ngăn cách bới intron dài, cần phải xử lý mẫu ARN với enzyme RNAse-free ADNase I hoặc ds-ADNase để loại bỏ ADN tổng số.

    Hình 4. Thiết kế đoạn mồi trong RT-PCR

    Khác với các phương pháp PCR thông thường hay qPCR chỉ khuếch đại được ADN thì RT-PCR cho phép chúng ta xác định được cả những loại virus, vi khuẩn mang vật chất di truyền là ARN cũng như xác định được trình tự của một đoạn ARN bất kì nào đó một cách dễ dàng hơn.

    Đây cũng là một trong những phương pháp được áp dụng nhiều nhất song song với test kháng thể (antibodies) để phục vụ cho truy vết và xét nghiệm một sô loại virus như Zika, HIV, sởi,… nói chung cũng như SARS-CoV-2 đang hoành hành gần đây nói riêng.

    TÀI LIỆU THAM KHẢO

    1. ThS. BS. Vũ Thị Thúy Chi, Xét nghiệm PCR có những ưu – nhược điểm gì? Trung tâm Xét nghiệm, Bệnh viện Đa khoa MEDLATEC, 2022

    2. Công ty TNHH Hamesco Việt Nam, Kĩ thuật Real-time PCR là gì? 2022.

    3. RT-qPCR – Các nguyên lý cơ bản, Sinh học phân tử, Công nghệ sinh học, Dịch và tổng hợp từ Thermo Scientific BioMedia VN.

    4. Nguyễn Thành Khôi, 4 Sự thật gây mất lòng về real-time PCR! Sinh học phân tử.

    5. Xét Nghiệm SARS-CoV-2 / COVID-19, Bệnh viện Nguyễn Tri Phương.

    6. Kỹ thuật Realtime PCR – đếm tải lượng virus, vi khuẩn, BioMedia, 2022.

    7. chúng tôi Trần Bá Thoại, Uỷ viên BCH Hội Nội tiết Việt Nam, Xét nghiệm PCR trong chẩn đoán Y khoa, Đại học Phan Châu Trinh

    Hiệu đính: chúng tôi Ngô Thiện

    =====

    Để nhận tư vấn về sản phẩm và đặt hàng, vui lòng liên hệ:

    CÔNG TY CỔ PHẦN DƯỢC PHẨM FYKOFA

    Hotline: 1800 234 555 (Miễn phí)

    Email: [email protected]

    Website: www.fykofa.com

    Fanpage: www.fb.com/duocphamFYKOFA

    --- Bài cũ hơn ---

  • Về Các Tội Xâm Phạm Tính Mạng, Sức Khỏe, Nhân Phẩm, Danh Dự Của Con Người (Phần I)
  • Câu Hỏi Thường Gặp Trong Ngoại Thương (Chuẩn Nhất)
  • Các Từ Tiếng Anh Dễ Gây Nhầm Lẫn Khi Sử Dụng
  • Sự Khác Biệt Giữu Forex Và Chứng Khoán
  • Website Là Gì? Phân Biệt Các Loại Website Trong Thiết Kế Web
  • Ứng Dụng Phương Pháp Rt

    --- Bài mới hơn ---

  • Ưu Điểm Của Kỹ Thuật Real
  • Kỹ Thuật Realtime Pcr Sử Dụng Mẫu Dò Taqman
  • Quy Trình Pcr Kỹ Thuật Số Gồm Bao Nhiêu Bước?
  • Sử Dụng Kỹ Thuật Polymerase Chain Reaction (Pcr) Khảo Sát Thử Nghiệm Nguy Cơ Nhiễm Listeria Monocytogenes Trong Một Số Thực Phẩm Trên Thị Trường Hà Nội
  • Tìm Hiểu Về Xét Nghiệm Sars
  • Trang: 259

    Tập 27, số 11 2022

    Application of RT-PCR method for identification of Hepatitis A virus in Hepatitis A vaccine

    Tác giả: Lưu Thị Dung, Đoàn Hữu Thiển, Nguyễn Thị Lý, Nguyễn Thị Hồng Định, Phạm Văn

    Hùng

    Tóm tắt:

    Nghiên cứu ứng dụng phương pháp RT-PCR (Reverse transcription – Polymerase Chain Reaction) để

    xác định sự có mặt của vi rút viêm gan A trong các loại vắc xin viêm gan A nhằm xây dựng một quy trình

    nhận dạng chung cho các loại vắc xin viêm gan A. Các vắc xin viêm gan A được lựa chọn để tiến hành thử

    nghiệm gồm: 2 loại vắc xin nhập khẩu là Avaxim, Epaxal và vắc xin Havax được sản xuất trong nước. Kết

    quả cho thấy: Các chủng vi rút viêm gan A được phát hiện có trong vắc xin bởi sản phẩm của phản ứng

    RT-PCR được tạo thành với cặp mồi đặc hiệu để khuếch đại đoạn gen C-VP3 kích thước 206 nucleotit.

    Trước khi tiến hành phản ứng RT-PCR, cần phải tiến hành loại bỏ nhôm và các thành phần tham gia phản

    ứng RT-PCR như sau: 5μl dung dịch đệm (master mix), 5 μl H2O, 1,25 μl dNTP, 1,25 μl mồi xuôi và mồi

    ngược, 1,25 μl enzyme, 5μl dung dịch Q , 5μl ARN khuôn và chu trình chạy: 50°C 30 phút, 95°C 15 phút,

    94°C trong 1 phút, 48°C trong 1 phút, 72°C trong 2 phút, 72°C 10 phút, 40 chu kỳ.

    Summary:

    RT-PCR (Reverse Transcription-

    Polymerase Chain Reaction) method is applied

    to determine to psence of hepatitis A virus in

    hepatitis A vaccines and to develop a generic

    identity process for hepatitis A vaccines. There

    are 3 hepatitis A vaccines selected in this test

    including 2 imported vaccines (Avaxim and

    Epaxal) and Havax (a domestic production).

    Hepatitis A virus strains was detected in the

    results of RT-PCR product which was formed

    with specific primers to amplify the 206

    nucleotide C-VP3 gene fragment. Before the

    performance of RT-PCR, aluminum should be

    removed and the components of RT-PCR are

    listed as follow: 5μl Master mix buffer, 5 μl

    H2O, 1.25 μl dNTP, 1.25 μl forward primer,

    1.25 μl reverse primer, 1.25 μl enzyme, 5 μl

    Q solution, 5 μl ARN Template, and cycle of

    reaction was 500C in 30 minutes, 950C in 15

    minutes, 940C in 1 minute, 480C in 1 minute,

    720C in 2 minutes, 720C in 10 minutes for 40

    cycles.

    Từ khóa:

    Viêm gan A , phản ứng RT-PCR, vắc xin

    Keywords:

    Hepatitis A virus, vaccine, RT-PCR.

    File nội dung:

    o1711259.pdf

    Tải file:

    Tải file với tiền ảo trong tài khoản thành viên.

    --- Bài cũ hơn ---

  • Bảng Tin Công Nghệ Trang Labshopvn.com
  • Kính Chào Bác Sĩ! Em Tên Hồngem Được Biết Phương Pháp Điều Trị Viêm Phụ Khoa Bằng Oxygen Đang Là Phương Pháp Hiệu Qủa Và Tiên Tiến. Không Biết Ở Bệnh Viện Hùng Vương Đã Có Chư
  • Cách Sinh Con Gái – Những Tip Có Thể Mẹ Chưa Biết!
  • Sinh Con Trai Theo Ý Muốn Bằng Phương Pháp Shettles – Sinh Con Trai
  • Bí Quyết Cách Sinh Con Trai Theo Khoa Học
  • Máy Pcr Là Gì? Công Dụng Của Máy Pcr Pockit Cầm Tay

    --- Bài mới hơn ---

  • Khái Quát Về Kỹ Thuật Real Time Pcr Là Gì? Ứng Dụng Chẩn Đoán Bệnh Tôm
  • Pcr Là Gì? Nguyên Tắc, Qúa Trình & Ứng Dụng Của Máy Chu Kỳ Nhiệt
  • Pcr Nguyên Tắc Và Ứng Dụng
  • Việt Nam Bổ Sung Phương Pháp Xét Nghiệm Ncov Mới
  • Xử Lý Nước Thải Bằng Phương Pháp Oxi Hóa
  • Những năm gần đây, với việc ứng dụng máy PCR trong chẩn đoán bệnh tôm đã giúp người nuôi sàng lọc và ngăn ngừa dịch bệnh lây lan từ đó giảm thiệt hại đáng kể, đem lại năng suất cao cho vụ nuôi. Nhưng nhiều người khi mới bước chân vào nghề vẫn còn băn khoăn chưa biết máy PCR là gì? Công dụng máy PCR ra sao? Nên mua máy PCR ở đâu uy tín hiện nay? Câu trả lời sẽ được chúng tôi giải đáp trong bài viết này.

    Ngành nuôi tôm công nghiệp đang phát triển nhanh chóng, thu hút nhiều doanh nghiệp đầu tư và đem lại nguồn ngoại tệ lớn cho đất nước. Các mô hình nuôi tôm thâm canh mật độ cao ngày càng được mở rộng kéo theo đó là những thách thức về dịch bệnh, biến đổi khí hậu gây thiệt hại lớn cho vụ nuôi. Bệnh hoại tử gan tụy trên tôm đã từng gây tổn thất lớn cho ngành tôm toàn cầu. Trong giai đoạn năm 2009 – 2022 dịch bệnh EMS/AHPND bùng phát mạnh mẽ đã gây thiệt hại khoảng 22,5 tỷ USD cho ngành nuôi tôm công nghiệp tại Châu Á. Với việc ứng dụng máy PCR trong xét nghiệm bệnh tôm là phương pháp hữu hiệu giúp chẩn đoán chính xác các loại bệnh có nguồn gốc từ vi khuẩn, virus gây ra, từ đó đưa ra biện pháp phòng trị hiệu quả nhất.

    Tìm hiểu máy PCR là gì?

    Máy PCR (máy luân nhiệt) là thiết bị không thể thiếu trong phòng Lab thủy sản, ứng dụng trong chẩn đoán các bệnh do vi khuẩn, virus gây bệnh trên tôm và cá. Phản ứng PCR dựa vào đặc tính DNA bị biến tính ở nhiệt độ cao và hồi tính.

    Kỹ thuật PCR được ứng dụng chẩn đoán bệnh tôm

    Trước đây, PCR truyền thống cần phải có giai đoạn phân tích sau khi khuếch đại. Nhưng hiện nay, các loại máy PCR real time cho kết quả khuếch đại AND đích được hiển thị sau mỗi chu kỳ phản ứng PCR.

    PCR real time là kỹ thuật nhân bản AND đích trong ống nghiệm thành nhiều bản sao dựa vào chu kỳ nhiệt khác nhau, kết quả khuếch đại sẽ được hiển thị cùng một lúc. Ưu điểm khi sử dụng máy PCR real time là không cần phải thực hiện thao tác điện di sản phẩm PCR trên gel agarose nhằm xác định sản phẩm sau khuếch đại.

    Nguyên lý máy PCR hoạt động như nào?

    Phản ứng PCR gồm nhiều chu kỳ nối tiếp nhau, mỗi chu kỳ sẽ lặp đi lặp lại 3 bước sau đây:

    Bước 1: Tách sợi DNA thành sợi đơn ở nhiệt độ 94 – 95 độ C

    Bước 2: Bắt cặp mồi vào sợi DNA nhiệt độ khoảng 55 – 65 độ C

    Bước 3: Kéo dài chuỗi mới ở nhiệt độ 72 độ C. Bước này cần phải có sự hiện diện các deoxy nucleoside triphosphate (dNTP).

    Công dụng máy PCR trong nuôi tôm

    Nắm được máy PCR là gì rồi thì chắc hẳn người nuôi còn băn khoăn không biết công dụng máy PCR trong nuôi tôm như thế nào đúng không?

    Hiện nay, kỹ thuật PCR được sử dụng phổ biến trong lĩnh vực thủy sản, thú y, sinh dược, thực phẩm, nghiên cứu,… Trong nuôi tôm công nghiệp, máy PCR được sử dụng trong chẩn đoán, phát hiện nhanh các bệnh nguy hiểm trên tôm như: EMS, IMNV, YHV, EHP,….

    Nếu trước đây, khi cần phải xét nghiệm bệnh tôm thì người nuôi cần phải tìm đến phòng thí nghiệm thủy sản. Nhưng giờ đây, khi khoa học kỹ thuật ngày càng phát triển, con người đã cho ra đời những loại máy PCR Pockit vận hành dựa trên công nghệ iiPCR cho phép chẩn đoán nhanh bệnh tôm ngay tại ao nuôi chỉ trong 1 giờ đồng hồ.

    Máy PCR có thể chẩn đoán nhanh một số bệnh trên tôm như:

    – WSSV: Bệnh đốm trắng trên tôm

    – EHP: Bệnh vi bào tử trùng trên tôm

    – AHPND/EMS: Bệnh hoại tự gan tụy trên tôm

    – TSV: Hội chứng Taura trên tôm

    – YHV: Bệnh đầu vàng trên tôm

    – IMNV: Bệnh hoại tử cơ trên tôm

    – IHHNV: Bệnh hoại tử dưới vỏ và cơ quan tạo máu

    – NHPB: Vi khuẩn gây hoại tử trên tôm

    – …..v.v.v

    Xét nghiệm PCR phát hiện sớm Vibrio gây bệnh hoại tử gan tụy trên tôm

    Ngoài ra, kỹ thuật PCR còn được ứng dụng để nhận dạng sinh vật, phát hiện các đột biến gen, nhân dòng gen, nghiên cứu sự biểu hiện den, tạp đột biến định vị,…

    Ưu điểm của máy PCR

    – Cho kết quả chính xác và nhanh chóng

    – Đơn giản, dễ thực hiện

    – Yêu cầu về độ tinh sạch của mẫu không cần cao

    – Kỹ thuật PCR cho phép phân biệt được gen đột biến do mất đoạn, thêm đoạn, đột biến điểm

    TOP 2 loại máy PCR nên dùng hiện nay

    1. Máy PCR – Pockit Xpss

    Pockit Xpss xuất xứ GeneReach Biotechnology – Đài Loan được vận hành dựa trên kỹ thuật IIPCR hiện đại với đầu dò Taqman cho phép chẩn đoán nhanh các bệnh thường gặp tên tôm thẻ chân trắng, tôm sú. Kết quả được hiển thị trên màn hình LCD, độ nhạy với 10 copy/ phản ứng. Sản phẩm đo được 8 mẫu/ lần đo và có thể tiến hành tại ao nuôi.

    Máy Pockit Xpss có sẵn tại chúng tôi

    2. Máy PCR – Pockit Micro Plus

    Pockit Micro Plus cũng là một dòng máy xuất xứ GeneReach Biotechnology – Đài Loan nhưng thiết kế nhỏ gọn hơn so với máy Pockit Xpss. Máy được thiết kế màn hình cho phép đọc kết quả dương tính hoặc âm tính một cách chính xác. Độ nhạy 10 copy/ phản ứng, với 4 mẫu/ lần.

    Máy Pockit Micro Plus xét nghiệm bệnh ngay tại ao nuôi Bà Lê Thị Sol Pha – Công ty CP Công nghệ AquaMekong cho biết: “Việc định kỳ sử dụng máy PCR để kiểm soát bệnh trong ao nuôi tôm là tiền đề lớn cho một vụ nuôi thành công. Chính vì thế, hãng GeneReach Biotechnology – Đài Loan đã đem đến công nghệ “Bác sĩ di động” giúp người nuôi chẩn đoán, phát hiện nhanh các bệnh trên tôm để có các biện pháp phòng và trị bệnh một cách hiệu quả. Việc sử dụng máy PCR trong nuôi tôm còn đem lại lợi ích đáng kể trong việc: kiểm tra chất lượng con giống, quản lý tốt sức khỏe tôm nuôi, đồng thời sàng lọc các mối rủi ro, ngăn ngừa sự lây lan dịch bệnh.”

    Đại chỉ mua máy PCR uy tín

    Đứng trước tình hình nuôi tôm công nghiệp tại Việt Nam gặp nhiều về cản trở như dịch bệnh, biến đổi hậu,… Một trong những giải pháp khắc phục hiệu quả là áp dụng công nghệ 4.0 vào thủy sản nhằm giúp người nuôi kiểm soát dịch bệnh hiệu quả nhất. Hiểu được điều đó, chúng tôi đã hợp tác với hãng GeneReach Biotechnology – Đài Loan đem đến cho người nuôi tôm 2 loại máy Pockit Xpss, Pockit Micro Plus với mức giá hợp lý.

    Máy PCR giá bao nhiêu tại Dr.Tom?

    Hiện tại chúng tôi bán máy PCR Pockit Xpss có mức giá 130.000.000 VNĐ; Máy PCR cầm tay Pockit Micro Plus có giá 54.800.000 VNĐ. Với mức giá trên, đối với những hộ nuôi khá giả, có hệ thống ao nuôi lớn thì nên đầu tư 1 thiết bị PCR Pockit chuyên dụng. Còn đối với những hộ nuôi khó khăn hơn thì nên mua theo hình thức hợp tác xã, khoảng 3 – 4 hộ chung 1 máy Pockit Xpss hoặc Pockit Micro Plus để tiết kiệm chi phí đầu tư mà vẫn đảm bảo kiểm tra, kiểm soát được tình hình dịch bệnh trong ao nuôi tôm cách hiệu quả.

    THAO TÁC XÉT NGHIỆM BỆNH TÔM BẰNG PCR POCKIT XPRESS

    Top 2 loại PCR Pockit đang có sẵn tại chúng tôi Liên hệ ngay số HOTLINE 1900 2620 để được tư vấn chi tiết về công dụng, cách sử dụng, báo giá máy PCR tốt nhất. Hy vọng rằng, bài viết về máy PCR là gìcông dụng máy PCR đã giúp người nuôi có thêm kiến thức để áp dụng vào kiểm soát dịch bệnh một cách hiệu quả nhất.

    --- Bài cũ hơn ---

  • Các Kỹ Thuật Pcr Và Ứng Dụng
  • Tìm Hiểu Về Dịch Vụ Xét Nghiệm Xác Định Đột Biến Gen Bằng Kỹ Thuật Pcr
  • Tư Vấn Xét Nghiệm Hiv Bằng Phương Pháp Pcr
  • Tìm Hiểu Phương Pháp Xét Nghiệm Pcr Hiv Hiện Nay
  • Tại Sao Áp Dụng Gộp Mẫu Thực Hiện Xét Nghiệm Rt
  • Máy Pcr Là Gì? Các Loại Máy Pcr Trong Chăn Nuôi

    --- Bài mới hơn ---

  • Kỹ Thuật Pcr Là Gì? Ứng Dụng Trong Chẩn Đoán Bệnh Trên Tôm Thế Nào?
  • Phương Pháp Định Tính Bằng Kỹ Thuật Polymerase Chain Reaction
  • Người Dân Hà Nội Lo Lắng, Chờ Đợi Được Xét Nghiệm Rt
  • Bài Tập Cân Bằng Phản Ứng Oxi Hóa Khử
  • Ứng Dụng Của Chuẩn Độ Oxi Hóa
  • Máy PCR từ lâu đã được sử dụng phổ biến trong các nghiên cứu sinh học, y học nhằm phát hiện các bệnh do virus, vi khuẩn, chẩn đoán những bệnh nhiễm trùng, tách dòng gene và xác định huyết thống,… Bài viết này HappyVet sẽ cùng quý bạn đọc đi tìm hiểu chi tiết về máy PCR là gì và các loại máy PCR được sử dụng phổ biến trong chăn nuôi.

    TỔNG QUAN VỀ MÁY PCR

    1. Máy PCR là gì?

    Máy PCR (máy luân nhiệt) là thiết bị chẩn đoán bệnh thú y không thể thiếu trong phòng lab sinh học, y tế. PCR là chữ viết tắt của cụm từ Polymerase Chain Reaction – Đây là phương pháp khuếch đại nhanh nhiều bản sao các đoạn DNA mà không qua tạo dòng. Nếu trước đây một thí nghiệm sinh học phân tử phải kéo dài hàng tuần, hàng tháng, thì ngày nay nhờ kỹ thuật PCR ra đời mà các thí nghiệm chỉ thực hiện trong vài ngày, thậm chí trong vài giờ.

    Kỹ thuật PCR được ứng dụng trong nhiều lĩnh vực như chẩn đoán, xét nghiệm các tác nhân vi sinh vật gây bệnh, xác định giới thính của phôi, giải mã di truyền, tạo giống, nghiên cứu sự tiến hóa của sinh vật ở mức độ phân tử, chẩn đoán bệnh do virus, vi khuẩn gây bệnh,…

    Nếu như kỹ thuật PCR truyền thống cần phải có giai đoạn phân tích sau khuếch đại thì hiện nay các loại máy PCR real time cho kết quả khuếch đại AND đích được hiển thị sau mỗi chu kỳ phản ứng. Ưu điểm của việc sử dụng PCR real time là không cần phải thực hiện thao tác điện di sản phẩm PCR trên gel agarose nhằm xác định sản phẩm sau khuếch đại.

    2. Nguyên lý máy PCR

    Nguyên lý hoạt động của máy PCR là việc tổng hợp DNA dựa trên mạch khuôn là một trình tự đích DNA ban đầu, khuếch đại, nhân số lượng bản sao của khuôn này thành hàng triệu bản sao thông qua hoạt động của enzyme polymerase và một cặp mồi đặc hiệu cho đoạn DNA này.

    Phản ứng PCR gồm nhiều chu kỳ và được lặp lại nối tiếp nhau, mỗi chu kỳ được diễn ra theo 3 bước:

    Bước 1: Biến tính tách đôi sợi DNA: Được thực hiện ở nhiệt độ cao hơn nhiệt độ nóng chảy của phân tử (94 – 95 0 C) trong vòng 30 – 60 giây. Lúc này, phân tử DNA mạch kép sẽ được tách thành hai mạch đơn (đóng vai trò là mạch khuôn cho sự tổng hợp hai mạch bổ sung mới).

    Bước 2: Bắt cặp mồi: Được thực hiện ở nhiệt độ thấp hơn so với nhiệt độ nóng chảy (Tm) của các Primer, nhiệt độ dao động trong khoảng 55 – 65 0 C. Thời gian bắt cặp kéo dài từ 30 – 60 giây tùy vào Tm của các primer.

    Bước 3: Kéo dài: Được thức hiện ở nhiệt độ 72 0 C giúp cho DNA polymerase có môi trường hoạt động tốt nhất. Lúc này, dưới tác động của DNA polymerase, các nucleotide sẽ lần lượt gắn vào primer theo nguyên tắc bổ sung với mạch khuôn. Thời gian kéo dài khoảng 30 giây đến vài phút tùy thuộc vào độ dài của trình tự DNA khuếch đại.

    Qua 3 bước, một DNA đích sẽ được nhân lên thành hai bản sao và chu kỳ được lặp đi lặp lại liên tục từ 30 – 40 chu kỳ. Lúc này, từ một DNA đích sẽ nhân lên thành 2 30 đến 2 40 bản sao, tức là hàng tỷ bản sao.

    3. Cấu tạo máy PCR

    Mỗi loại máy PCR lại có cấu tạo khác nhau. Bạn có thể lựa chọn PCR với 2 hoặc 3 block hoặc block thông thường 96 giếng, hoặc cũng có thể lựa chọn các loại máy PCR cầm tay để đem đi hiện trường. Ở nhiều trung tâm nghiên cứu hay bệnh viện lớn họ thường xây dựng series nhiều máy luân nhiệt được liên kết với nhau để tạo ra một hệ thống máy PCR lớn và được điểu khiển bởi một hệ thống máy tính trung tâm hiện đại.

    ƯU ĐIỂM CỦA MÁY PCR

    Kỹ thuật PCR đem đến nhiều ưu điểm vượt trội hơn hẳn so với các xét nghiệm thông thường khác như:

    • Kết quả thu được chính xác trong vài giờ.
    • Phát hiện được các virus, vi khuẩn gây bệnh.
    • Cho phép xác định được các tác nhân vi sinh không thể nuôi cấy trong phòng thí nghiệm lâm sàng vì khả năng dịch cao hay khó nuôi cấy.
    • Phát hiện sớm các đột biến gen gây ung thư, bệnh di truyền,…
    • Xác định huyết thống giữa các cá thể khác nhau.

    CÁC LOẠI MÁY PCR TRONG CHĂN NUÔI

    Hiện nay, kỹ thuật PCR được sử dụng phổ biến trong việc chẩn đoán bệnh trên gia súc, gia cầm, thủy sản,… nhằm phát hiện sớm và đưa ra hướng điều trị hiệu quả.

    Kỹ thuật PCR có thể chẩn đoán được hầu hết các bệnh nguy hiểm trên vật nuôi:

    • Bệnh trên lợn: Dịch tả lợn Châu Phi, dịch tả lợn cổ điển, giả dại, đóng dấu lợn,…
    • Bệnh trên gia cầm: CRD, Marek, Leucosis, Newcastle,…
    • Bệnh trên bò: Bò điên, tụ huyết trùng trâu bò, tiêu chảy do virus trên bò,…
    • Bệnh trên chó: Parvo, Care, bệnh lỵ do Giardia intestinalis,….
    • Bệnh trên tôm: Vi bào tử trùng, đốm trắng, Taura, hoại tử gan tụy,…

    HappyVet giới thiệu cho người nuôi hệ thống máy PCR Pockit được thiết kế linh hoạt, cho phép đồng thời chẩn đoán được nhiều bệnh trong một lần chạy mẫu, cho kết quả trong vài giờ đồng hồ.

    1. Máy Pockit Central

    Pockit Central là thiết bị PCR được sử dụng trong phòng thí nghiệm. Máy được tích hợp đồng thời hệ thống ly trích Acid Nucleic và phản ứng iiPCR giúp rút ngắn thời gian chẩn đoán mầm bệnh. Thao tác thực hiện đơn giản, chỉ cần đưa mẫu vào máy và bấm nút và chờ kết quả.

    2. Máy Pockit Xpss

    Pockit Xpss là một trong những loại máy PCR đang được rất nhiều bà con lựa chọn. Sản phẩm được thiết kế như một phòng thí nghiệm thu nhỏ, toàn bộ hệ thống chẩn đoán được đặt trong một chiếc vali xách tay vận chuyễn dễ dàng đến các trang trại, các cửa khẩu hay các vùng dịch, giúp phát hiện nhanh mầm bệnh.

    Hệ thống PCR được thiết kế linh hoạt, một chương trình có thể ứng dụng cho tất cả các chỉ tiêu và cho phép chẩn đoán được nhiều bệnh trong một lần chạy mẫu.

    3. Máy Pockit Pro

    Pockit Pro cũng được vận hành dựa trên phương pháp iiPCR, cho kết quả nhanh chóng trên màn hình LCD và tự động lưu vào thẻ SD. Sản phẩm được thiết kế linh hoạt, một chương trình có thể ứng dụng cho tất cả các chỉ tiêu, đồng thời cho phép chẩn đoán nhiều bệnh chỉ trong một lần chạy mẫu.

    4. Máy Pockit micro

    Pockit micro là một trong những dòng thế hệ mới của phương pháp iiPCR với độ nhạy cao, cho kết quả chính xác, thiết kế dạng cầm tay và dễ dàng đọc kết quả âm tính hoặc dương tính trên màn hình.

    • Số mẫu: 1 – 4 mẫu/ lần
    • Thời gian: 30 phút
    • Khối lượng: 380g

    5. Máy Pcokit micro Plus

    Máy pcr cầm tay Pockit micro Plus cũng là thế hệ mới nhất của phương pháp iiPCR với nhiều cải tiến trong thiết kế như trọng lượng nhẹ, pin sạc tích hợp, dễ dàng sử dụng và có thể vận hành ở mọi nơi và mọi thời điểm.

    Hình ảnh máy PCR cầm tay Pockit micro Plus

    6. Máy Pockit micro Duo

    Micro Duo là dòng sản phẩm mới nhất của series máy phân tích cầm tay Pockit Micro với hai bước sóng chẩn đoán 520nm, 550nm. Sản phẩm có khả năng chẩn đoán chính xác mầm bệnh do virus, vi khuẩn gây ra trên thú y.

    --- Bài cũ hơn ---

  • Các Quy Trình Xét Nghiệm Chẩn Đoán
  • Xét Nghiệm Phát Hiện Bệnh Lậu Bằng Phương Pháp Pcr
  • Kiểm Nghiệm Salmonella Bằng Phương Pháp Real
  • Nguyên Tắc Real Time Pcr
  • Phương Pháp Real Time Pcr Với Kit Iiq
  • Phương Pháp Pcr Xét Nghiệm Covid

    --- Bài mới hơn ---

  • Những Ai Cần Làm Xét Nghiệm Rt
  • Tại Sao Áp Dụng Gộp Mẫu Thực Hiện Xét Nghiệm Rt
  • Tìm Hiểu Phương Pháp Xét Nghiệm Pcr Hiv Hiện Nay
  • Tư Vấn Xét Nghiệm Hiv Bằng Phương Pháp Pcr
  • Tìm Hiểu Về Dịch Vụ Xét Nghiệm Xác Định Đột Biến Gen Bằng Kỹ Thuật Pcr
  • Xét nghiệm đang được dùng để xác định nhiễm virus Corona được gọi là xét nghiệm PCR (Polymerase chain reaction) hay còn có tên là xét nghiệm sinh học phân tử từ chuỗi phản ứng Polimerase. PCR là một kỹ thuật không mới, được phát minh bởi nhà khoa học người Mỹ Kary Mullis. Trên thực tế người ta đã sử dụng PCR từ những năm 1980 và ứng dụng phương pháp này vào chẩn đoán cho các bệnh truyền nhiễm khác. Đây là một kỹ thuật nhằm tạo ra một lượng lớn các bản sao DNA mục tiêu sao cho đủ nhiều để phát hiện và xác nhận sự nhiễm trùng. Chỉ từ một lượng mẫu rất nhỏ, kỹ thuật PCR cũng có thể khuếch đại và tạo ra hàng triệu bản sao một cách chính xác và dễ dàng.

    Để kiểm tra sự tồn tại của virus trước hết người ta sẽ dùng que lấy mẫu tại các mô và dịch cơ thể ở nhiều vị trí, thường sẽ là mũi hoặc cổ họng của bệnh nhân. Que mẫu sau đó sẽ được bảo quản trong ống và gửi đến phòng thí nghiệm để phân tích. Quá trình phân tích diễn ra khá phức tạp và thường tốn một vài ngày cho tới vài tuần kể từ khi lấy mẫu.

    DNA chính là vật liệu di truyền để cấu thành các đặc điểm của chúng ta và cả một số loại virus. Thế nhưng virus gây ra COVID-19, SARS-CoV-19 (và nhiều loại virus khác) lại không chứa các chuỗi DNA kép mà chỉ chứa RNA chuỗi đơn. Bên cạnh đó do xét nghiệm PCR chỉ có thể tạo ra bản sao cho DNA, vì thế trước hết người ta cần phải chuyển đổi RNA thành DNA.

    Người ta sẽ chiết xuất RNA của virus từ que mẫu. Sau đó, mẫu thử cần được lọc tế bào người và các enzyme ra để đem đi làm xét nghiệm PCR. Thông thường các phòng thí nghiệm sẽ sử dụng bộ kits dụng cụ được sản xuất đặc biệt phục vụ cho mục đích này. Sau đó, RNA tinh khiết được trộn với một enzyme được gọi là enzyme phiên mã ngược, enzyme này sẽ có nhiệm vụ chuyển đổi RNA chuỗi đơn thành DNA chuỗi kép để có thể sử dụng được kỹ thuật PCR. Cái vụ chuyển từ RNA thành DNA này sinh học cấp hai có rồi đó, anh em nào mà học chăm là biết à.

    Tiếp đến, DNA của virus được cho vào ống nghiệm và thêm vào các chất sau:

    • Các đoạn mồi: Đây là những đoạn DNA ngắn được chế tạo để có thể liên kết với DNA của virus.
    • Nucleotide: những thành phần cơ sở để cấu thành DNA, gồm các loại A T G X
    • Một enzyme tạo dựng DNA: mục đích để tạo ra các bản sao cho DNA
    • Một máy PCR gia nhiệt hỗn hợp sẽ được sử dụng để làm duỗi thẳng các đoạn DNA sợi kép, sau đó các đoạn mồi có thể liên kết được với DNA khi đã nguội. Khi các đoạn mồi đã liên kết với DNA, chúng sẽ tạo ra một điểm khởi đầu cho các enzyme xây dựng DNA và bắt đầu sao chép các đoạn đó để tạo ra DNA. Thông qua việc gia nhiệt và làm lạnh, quá trình này sẽ lặp lại nhiều lần đến khi hàng triệu bản sao DNA được tạo ra. Điều này cũng giải thích cách PCR khuếch đại mã di truyền của virus.
    • Tiếp đến thuốc nhuộm huỳnh quang được thêm vào ống nghiệm trong khi DNA đang được nhân bản. Thuốc nhuộm này liên kết với DNA đã sao chép, làm tăng cường màu huỳnh quang và sáng hơn. Chính ánh sáng này là dấu hiệu để người ta nhận biết sự hiện diện của virus.

    Cường độ huỳnh quang tỉ lệ thuận với các bản sao DNA của virus được tạo ra. Khi cường độ huỳnh quang của mẫu vượt quá ngưỡng mức nhất định thì mẫu được xem là dương tính. Trong trường hợp mẫu không chứa virus, xét nghiệm PCR không tạo ra các bản sao, do đó ngưỡng huỳnh quang không đạt mức nền, thử nghiệm được xem là âm tính.

    Lý do đơn giản là bởi thời gian, kết quả xét nghiệm PCR có thể mất đến vài giờ. Vấn đề về thời gian cùng với khả năng có thể xét nghiệm sẽ tạo ra giới hạn số lượng xét nghiệm mà một phòng thí nghiệm có thể thực hiện trong một ngày. Chẳng hạn một phòng thí nghiệm nghiên cứu nhỏ có thể xét nghiệm được 80 mẫu một ngày, với những nơi quy mô được trang bị nhiều máy hơn, năng suất có thể là 1000-2000 mẫu. Một hạn chế khác là việc thiếu thuốc thử cần thiết để làm xét nghiệm. Do nhu cầu xét nghiệm rất cao dẫn đến sự thiếu hụt, nhiều quốc gia đã bị trì hoãn do thiếu thuốc thử.

    Mặc dù kỹ thuật PCR có độ chính xác cao thế nhưng ở một số trường hợp, kết quả cũng có sự sai lệch. Nguyên nhân chủ yếu là do mẫu phẩm bị nhiễm bẩn, hay bảo quản không đúng cách cũng có thể làm sai lệch kết quả, dẫn đến trường hợp dương tính giả (khi ai đó không có virus nhưng xét nghiệm lại có) hoặc âm tính giả (khi ai đó có virus nhưng kết quả cho thấy họ không nhiễm bệnh).

    Hạn chế cuối cùng của phương pháp PCR là kỹ thuật này chỉ có thể nhận biết virus tại ngay thời điểm thực hiện xét nghiệm. Trong trường hợp nếu ai đó đã từng mắc bệnh sau đó hồi phục trước thời điểm xét nghiệm, thì phương pháp này không thể xác định được. Bởi nếu ai đó đã từng có virus và đã phục hồi, họ sẽ sinh ra miễn dịch kháng virus trong một thời gian trước khi có khả năng tái nhiễm.

    Còn để xét nghiệm liệu ai đó đã từng nhiễm virus trước kia hay không, người ta sử dụng loại xét nghiệm dựa trên kháng thể. Vì khi đó cơ thể người từng nhiễm bệnh sẽ sản sinh ra loại kháng thể chống lại virus, các kháng thể đó vẫn tồn tại trong máu suốt một khoảng thời gian sau khi nhiễm bệnh. Và với phương pháp xét nghiệm kháng thể, người ta có thể phát hiện ra chúng. Hiện tại, một số công ty đang nghiên cứu xét nghiệm kháng thể đối với virus SARS-CoV-2 và dự kiến phương pháp này sẽ được triển khai nhanh chóng khi đã sẵn sàng.

    Ngoài ra, trong trường hợp thiếu hụt bộ dụng cụ xét nghiệm PCR, người ta cũng thực hiện một số xét nghiệm khác hiệu quả như xét nghiệm tìm kiếm các protein cụ thể trên bề mặt virus. Mặc dù phương pháp này tốn thời gian ít hơn so với PCR, thế nhưng độ sai lệch của phương pháp này cũng lớn hơn. Do đó, nhiều khả năng kết quả sẽ không chính xác.

    Cho đến khi tốc độ và số lượng thực hiện xét nghiệm tăng lên, nhiều quốc gia vẫn đang khuyến cáo người dân nên tự chủ động bảo vệ bản thân, tự cách ly tại nhà và khai báo y tế để ngăn chặn sự lây lan của virus.

    --- Bài cũ hơn ---

  • Chi Phí Khám Phụ Khoa Hết Bao Nhiêu Tiền 2022 (Giá Niêm Yết)
  • Oxygen Phương Pháp Điều Trị Viêm Đường Tiết Niệu Nữ Giới
  • Sinh Con Trai Theo Ý Muốn Bằng Phương Pháp Shettles
  • Sinh Con Theo Ý Muốn Bằng Phương Pháp Shettles
  • Phương Pháp Tránh Thai Tính Bằng Vòng Kinh Của Knaaus Và Ogino
  • Xét Nghiệm Pcr Là Xét Nghiệm Gì?

    --- Bài mới hơn ---

  • Trường Đại Học Khoa Học Tự Nhiên
  • Phương Pháp Ôn Thi Học Sinh Giỏi Môn Văn
  • Tài Liệu Hướng Dẫn Ôn Thi Học Sinh Giỏi Môn Văn
  • Phương Pháp Ôn Thi Môn Văn Đạt Điểm Cao
  • Xử Lý Nước Thải Bằng Phương Pháp Oxi Hóa Khử
  • Xét nghiệm PCR (Polemerase Chain Reaction, phản ứng chuỗi polymerase) được cho là xét nghiệm có giá trị rất cao và được thực hiện từ trong giai đoạn sớm. Đây là một phương pháp xét nghiệm có độ nhạy và độ đặc hiệu rất cao.

    1. Xét nghiệm PCR là gì?

    Xét nghiệm PCR hay còn gọi là xét nghiệm sinh học phân tử là một kỹ thuật nhằm tạo ra một lượng lớn bản sao DNA mục tiêu trong ống nghiệm dựa vào các chu kỳ nhiệt. Kỹ thuật này được nhà khoa học người Mỹ Kary Mullis phát minh vào năm 1985.

    Xét nghiệm PCR đóng vai trò quan trọng trong lĩnh vực công nghệ sinh học do phản ứng rất nhạy và cho kết quả đặc hiệu. Xét nghiệm PCR thường có kết quả độ chính xác rất cao. Tuy nhiên kết quả cũng còn tùy thuộc trình độ của kỹ thuật viên, phương tiện máy móc làm việc và việc quản lý chất lượng. Cùng một xét nghiệm nhưng có nơi cho kết quả nhạy và chính xác, nơi khác thì không có được độ nhạy bằng.

    Hiện nay để thực hiện xét nghiệm PCR thường đắt tiền hơn so với các xét nghiệm thông thường khác do hầu hết hóa chất để làm phản ứng đều phải nhập ngoại và phải mua với giá cao. Chưa kể các thiết bị để làm xét nghiệm PCR cũng lên đến vài chục ngàn USD/máy. Để xét nghiệm một bệnh phẩm, thường bạn phải chi trả 8-10 USD/lần.

    2. Xét nghiệm PCR chẩn đoán bệnh gì?

    • Phát hiện các tác nhân không thể nuôi cấy thường quy: như các virus (viêm gan B, viêm gan C, Dengue, HIV, Herpes, CMV, EBV, HPV, virus SARS, H5N1…), các vi khuẩn (Chlamydia, Legionella, Mycoplasma, Treponema pallidum…).
    • Phát hiện các vi khuẩn lậu (Chlamydia, Legionella, Mycoplasma, Treponema pallidum…).
    • Phát hiện các tác nhân nuôi cấy thất bại vì có mặt rất ít trong bệnh phẩm, đã bị điều trị kháng sinh trước đó (vd: Lao thất bại nuôi cấy, viêm màng não mủ mất đầu…).
    • Phát hiện mầm mống của bệnh ung thư (tìm HPV trong ung thư cổ tử cung, phát hiện gen APC trong ung thư đại tràng, gen BRCA1 – BRCA2 trong ung thư vú, gen TPMT trong bệnh bạch cầu trẻ em, gen Rb-105 trong u nguyên bào lưới, gen NF-1,2 trong u xơ thần kinh, gen IgH và TCRy trong u lympho không Hodgkin…)
    • Nghiên cứu về hệ kháng nguyên bạch cầu người (HLA, human lymphocyte antigen)…
    • Phát hiện các chủng vi khuẩn kháng thuốc như S.aureus – MRSA, các vi khuẩn sinh ESBL hoặc betalactamase, carbapenemase…)
    • Xác định độc tố của vi sinh vật: Tiểu đơn vị A của độc tố ruột không chịu nhiệt của Escherichia coli.
    • Trong công nghệ sinh học, xét nghiệm sinh học phân tử được sử dụng trong việc lập bản đồ gen, phát hiện gen, dòng hoá gen, giải mã trình tự ADN…

    3. Ưu – nhược điểm của xét nghiệm PCR

    3.1. Ưu điểm

    Phương pháp xét nghiệm PCR có nhiều ưu điểm vượt trội hơn hẳn so với xét nghiệm thông thường khác như:

    • Cho kết quả xét nghiệm nhanh, thường không quá 5 giờ kể từ khi bắt đầu làm xét nghiệm.
    • Phát hiện được các tác nhân vi sinh vật gây bệnh mà phòng thí nghiệm lâm sàng không có khả năng phát hiện với các xét nghiệm vi sinh hay miễn dịch truyền thống như các tác nhân virus (HCV, HBV, HPV…)
    • Xét nghiệm sinh học phân tử cho phép xác định được những tác nhân vi sinh không thể triển khai nuôi cấy được tại phòng thí nghiệm lâm sàng vì khả năng gây dịch cao (H5N1) hay khó nuôi cấy (C. trachomatis, L.pneumophila), hay có mặt rất ít trong bệnh phẩm ( tuberculosis trong lao ngoài phổi, tác nhân viêm màng não mủ cụt đầu…), hay là các tác nhân có thể nuôi cấy được nhưng thời gian có kết quả chung cuộc quá lâu (M. tuberculosis).
    • Xét nghiệm PCR còn có thể cho ra kết quả định lượng chính xác số bản copies virus/ 1 ml máu. Từ đó hỗ trợ rất đắc lực cho bác sĩ đánh giá được hiệu quả điều trị, cũng như tiên lượng giai đoạn bệnh.
    • Phát hiện các đột biến gen gây ung thư, gây các bệnh di truyền khác…nhằm có biện pháp phòng ngừa bệnh.
    • Xác định mối quan hệ huyết thống giữa những cá thể khác nhau.

    3.2. Nhược điểm

    • Xét nghiệm PCR rất khó thực hiện được một cách chuẩn mực tại các phòng thí nghiệm lâm sàng.
    • Giá thành của xét nghiệm PCR khá cao.
    • Xét nghiệm PCR đòi hỏi trình độ của kỹ thuật viên, bác sĩ phải là người có trình độ chuyên môn cao.
    • Đòi hỏi trang thiết bị, máy móc kỹ thuật hiện đại.

    Để được tư vấn trực tiếp, Quý Khách vui lòng bấm số HOTLINE hoặc đăng ký trực tuyến TẠI ĐÂY.

    --- Bài cũ hơn ---

  • Chữa Viêm Âm Đạo Hiệu Quả Bằng Phương Pháp O3 Oxygen
  • Điều Chỉnh Tật Cận Thị Bằng Kính Tiếp Xúc Cứng Qua Đêm Ortho
  • Tìm Hiểu Về Hàm Nội Suy Trong Excel
  • Phương Pháp Nghiên Cứu Định Tính
  • Top 8 Các Phương Pháp Nghiên Cứu Định Tính Phổ Biến
  • Những Ưu Điểm Của Phương Pháp Pcr

    --- Bài mới hơn ---

  • Nguyên Lý Của Phương Pháp Odc Là Gì?
  • Hướng Dẫn Tập Odc Theo 28 Bài Cơ Bản
  • Phương Pháp Tập Luyện Odc Có Thực Chống Được Xuất Tinh Sớm Không?
  • Odc Là Gì? Nguyên Nhân, Dấu Hiệu, Phương Pháp Điều Trị Hội Chứng Ocd
  • Máy Quang Phổ Phát Xạ Nguyên Tử
  • 1.Phát hiện đa mục tiêu dễ dàng hơn với phương pháp PCR – Điện di

    Phát hiện đa mục tiêu trong cùng một phản ứng (multiplex PCR, PCR đa mồi) thật sự là một thế mạnh vượt trội của phương pháp PCR – Điện di mà khó có phương pháp sinh học phân tử nào cạnh tranh lại, nhất là Real-time PCR.

    Nếu các bạn muốn dùng Real-time PCR để phát hiện nhiều trình tự mục tiêu, các bạn cần phải lưu ý một số hạn chế quan trọng sau đây:

    • Hệ thống máy Real-time PCR phải đọc được nhiều kênh màu huỳnh quang có phổ màu độc lập hoàn toàn với nhau, ví dụ 5-6 kênh huỳnh quang
    • Bắt buộc phải sử dụng mẫu dò huỳnh quang với chi phí tổng hợp rất cao, khoảng 500-700 USD cho một mẫu dò, tùy vào màu huỳnh quang
    • Số lượng trình tự mục tiêu tối đa có thể phát hiện là 5, vì phụ thuộc vào khả năng đọc của máy Real-time PCR
    • Giá máy Real-time PCR 5 màu cao hơn máy PCR thường 6-7 lần, tùy hãng sản xuất.

    Chính vì những hạn chế vừa nêu của kỹ thuật Real-time PCR, tôi khuyên bạn nên sử dụng phương pháp PCR – Điện di nếu muốn phát hiện đa mục tiêu. Chỉ cần chú trọng một chút vào khâu thiết kế mồi, các bạn sẽ dễ dàng có ngay một phản ứng multiplex PCR với chi phí rất phải chăng! Hình bên là một ví dụ sử dụng PCR – Điện di để phát hiện 4 kiểu gen (genotype) vi-rút Human papilloma (HPV) khác nhau. Các kiểu gen này bao gồm HPV 16, 18, 6/11 và nhóm kiểu gen HPV nguy cơ cao khác (HRC). Các bạn có thể thấy trong giếng ngoài cùng bên phải chính là một phản ứng multiplex PCR. Trong phản ứng này người ta dùng 4 cặp mồi đặc hiệu cho 4 kiểu gen/nhóm kiểu gen HPV và 1 cặp mồi nhân bản gen chứng nội của người (1000bp). Kết quả điện di cho thấy 5 sản phẩm PCR với kích thước khác nhau cùng xuất hiện rõ ràng. Điều này chứng tỏ phản ứng multiplex PCR có thể nhân bản thành công cùng lúc 5 trình tự mục tiêu khác nhau!

    “… tôi cũng từng phát triển thành công những phản ứng PCR phát hiện cùng lúc 8-11 trình tự mục tiêu khác nhau dành cho HPV nguy cơ cao. Trong thời gian gần đây, tôi cũng có dịp tiếp cận với các phản ứng PCR phát hiện được tới 18-22 vi-rút hoặc vi khuẩn gây bệnh đường hô hấp, tiêu hóa trên người…” (Tác giả)

    2.Giải trình tự gen theo phương pháp Sanger

    Trong nghiên cứu và chẩn đoán, phương pháp giải trình tự theo nguyên tắc Sanger có vai trò rất quan trọng. Kết quả của nó gần như là một “tiêu chuẩn vàng (gold standard)”, dùng để xác nhận lại kết quả của những phương pháp khác, trong đó có Real-time PCR. Tôi xin liệt kê một số ứng dụng của phương pháp giải trình tự mà bản thân từng có cơ hội tiếp như sau:

    • Xác định kiểu gen của vi-rút viêm gan siêu vi C dựa trên trình tự của vùng gen 5′-UTR và core
    • Phát hiện đột biến gen EGFR, BRCA, KRAS, v.v… trong chẩn đoán một số loại ung thư như phổi, vú, đại trực tràng
    • Định danh vi sinh vật dựa trên vùng gen 16s rRNA
    • Phát hiện lệch bội nhiễm sắc thể ở thai nhi bằng các vùng gen STR (Single Tadem Repeats) (chỉ xem sự khác biệt rất nhỏ về kích thước sản phẩm PCR, không xác định cụ thể trình tự)

    Trong quy trình giải trình tự theo phương pháp Sanger ở hình bên dưới, các bạn có thể thấy bước đầu tiên luôn là phản ứng PCR. Bước này có vai trò nhân bản chính xác những vùng gen mục tiêu cần để giải trình tự. Sau đó, sản phẩm PCR được tinh sạch từ gel điện di để loại bỏ hoàn toàn những sản phẩm phụ, mồi, enzyme, dNTP, v.v… Qua một số bước kế tiếp, sản phẩm PCR được dùng làm khuôn mẫu để tổng hợp nên những đoạn DNA ngắn có đánh dấu các màu huỳnh quang tương ứng với 4 loại nucleotide A, T, G và C. Cuối cùng máy điện di mao quản với đầu đọc huỳnh quang sẽ phân tích những đoạn DNA này và ghi nhận lại trình tự của sản phẩm PCR.

    3.Phương pháp PCR – Điện di tạo dòng và biểu hiện gen

    Trong giới nghiên cứu protein, người ta ít khi chú trọng hoặc thậm chí là không biết đến phương pháp PCR. Đây là

    mảnh đất độc tôn của các kỹ thuật ELISA, SDS-PAGE, Western blotting, điện di 2 chiều, sắc ký tinh chế, v.v… Tuy nhiên, nếu chịu khó để ý, các bạn sẽ thấy PCR dù ít xuất hiện nhưng vẫn thể hiện được tầm quan trọng của nó. Với quy trình tạo dòng và biểu hiện protein tái tổ hợp trong hình bên phải, phương pháp PCR – Điện di được sử dụng ở bước chuẩn bị gen mục tiêu trước khi lắp ghép với plasmid hay vector. Gen mục tiêu ở đây có thể là gen biểu hiện cho một protein nào đó của người hay sinh vật khác. Hai đoạn mồi sử dụng trong phản ứng nhân bản gen mục tiêu được thiết kế đặc biệt hơn bình thường. Đầu 5′ của 2 mồi này thường được gắn thêm trình tự nhận biết của enzyme cắt giới hạn. Sản phẩm PCR được tạo ra bởi 2 mồi này sẽ mang trình tự của gen mục tiêu bên trong (màu xanh dương) và trình tự nhận biết của enzyme cắt ở đầu 5′ và 3′ (màu xanh lá và đỏ). Sau đó, sản phẩm PCR được đem ủ với enzyme cắt giới hạn để tạo ra 2 đầu mút ở dạng mạch đơn. Hai đầu mút này tạo điều kiện cho sản phẩm PCR được nối vào một plasmid (cũng xử lý trước đó bằng cùng enzyme cắt giới hạn). Plasmid tái tổ hợp sau đó được chuyển vào tế bào chủ, ví dụ E. coli, để tiến hành biểu hiện protein mục tiêu.

    Bài viết thuộc bản quyền của Sinh Học Phân Tử Bên Giảng Đường. Nguồn: https://www.sinhhocphantu.net/2018/03/31/khi-nao-nen-chon-phuong-phap-pcr-dien-di/#Phat_hien_da_muc_tieu_de_dang_hon_voi_phuong_phap_PCR_8211_Dien_di

    Hiện Công ty TNHH Thiết bị ABT đang cung cấp thiết bị, hóa chất cho phản ứng PCR và quá trình điện di.

    --- Bài cũ hơn ---

  • Organic Là Gì ? Sản Phẩm, Chứng Nhận, Tiêu Chuẩn Organic
  • Organic Traffic Là Gì & Tầm Quan Trọng Của Nó Trong Seo Và Marketing
  • Organic Traffic Là Gì? Cách Tăng Lượng Organic Traffic Là Gì?
  • Không Gian Sống Thân Thiện Với Phong Cách Thiết Kế Organic
  • Hướng Dẫn Cơ Bản Oxygen Not Included
  • Tư Vấn Xét Nghiệm Hiv Bằng Phương Pháp Pcr

    --- Bài mới hơn ---

  • Tìm Hiểu Về Dịch Vụ Xét Nghiệm Xác Định Đột Biến Gen Bằng Kỹ Thuật Pcr
  • Các Kỹ Thuật Pcr Và Ứng Dụng
  • Máy Pcr Là Gì? Công Dụng Của Máy Pcr Pockit Cầm Tay
  • Khái Quát Về Kỹ Thuật Real Time Pcr Là Gì? Ứng Dụng Chẩn Đoán Bệnh Tôm
  • Pcr Là Gì? Nguyên Tắc, Qúa Trình & Ứng Dụng Của Máy Chu Kỳ Nhiệt
  • PCR (Polymerase Chain Reaction – Phản ứng chuỗi trùng phân) là một kỹ thuật then chốt trong di truyền học phân tử, được áp dụng để test kiểm tra nhiễm HIV giai đoạn sớm với độ nhạy cao.

    Kĩ thuật này cho phép phân tích bất kỳ một đoạn ngắn nào của chuỗi ADN (hay của chuỗi ARN) mà không phải nhân dòng vô tính đoạn ADN đó.

    PCR được sử dụng để tái tạo (khuếch đại) những đoạn ADN chọn lọc. Trước đây, việc khuếch đại này được thực hiện nhờ những vi khuẩn và phải mất hàng tuần. Nhưng giờ đây với kỹ thuật PCR được thực hiện trong các ống nghiệm thì chỉ mất một vài giờ. PCR hiệu quả cao đến nỗi có thể tạo ra vô số bản sao của ADN. Ngoài ra, PCR sử dụng chính những phân tử mà thiên nhiên sử dụng để sao chép ADN:

    – Hai “phân tử mồi” để đánh dấu vị trí bắt đầu và kết thúc của chuỗi ADN cần sao chép.

    – Một enzym có tên là polymerase (enzyme đồng phân hóa) chạy dọc theo đoạn ADN đó, đọc mã của ADN và lắp ráp nên một bản sao của ADN.

    – Rất nhiều khối bazơ mà polymerase sử dụng để xây nên bản sao của ADN.

    Do thử nghiệm PCR quá nhạy cảm, nên khi áp dụng trong chẩn đoán, một vấn đề rất quan trọng cần phải lưu tâm, đó là hiện tượng dương tính giả, chủ yếu là do mẫu thử bị nhiễm bởi các sản phẩm PCR trước đó. Chỉ cần mẫu thử bị nhiễm một hoặc vài mảnh sản phẩm PCR thì các mảnh này sẽ được khuếch đại và mẫu cho kết quả dương nhưng là dương giả. Đợi 12 tuần là cần thiết. Việc gì mà vội hả bạn ?

    Hiện nay xét nghiệm DNA_ PCR(Chuỗi phản ứng polymerase) là một trong những xét nghiệm có độ chính xác cao nhất tuy nhiên thời gian chính xác để thực hiện xét nghiệm này từ ngày có hanh vi nguy cơ vẫn còn gây nhiều tranh cãi (theo các tài liệu nước ngoài là 28 ngày,một số tài liệu của VN là 10 ngày hoặc theo một số bác sĩ của viện Pasteur là từ 3-7 ngày). Đây là một xét nghiệm khá tốn kém và quy trình khá phức tạp( dựa trên kĩ thuật nhiệt) nên thường chỉ dùng cho trẻ em(dưới 18 tháng tuổi) để phát hiện bản sao bộ ADN của HIV.Như Hiện tại theo mình biết viện Pasteur TPHCM dùng phương pháp này để xét nghiệm cho trẻ em dưới 18 tháng tuổi hoặc dùng đo nồng độ vi rút cho người có HIV.Viện Pasteur TPHCM nếu xét nghiệm PCR âm tính (dưới ngưỡng phát hiện) thì Bác Sĩ vẫn khuyên sau 12 tuần xét nghiệm lại

    Mọi thắc mắc về vấn đề HIV, vui lòng gọi đến tổng đài 19006237 để được tư vấn HIV, tư vấn xét nghiệm HIV trực tiếp từ các chuyên gia.

    --- Bài cũ hơn ---

  • Tìm Hiểu Phương Pháp Xét Nghiệm Pcr Hiv Hiện Nay
  • Tại Sao Áp Dụng Gộp Mẫu Thực Hiện Xét Nghiệm Rt
  • Những Ai Cần Làm Xét Nghiệm Rt
  • Phương Pháp Pcr Xét Nghiệm Covid
  • Chi Phí Khám Phụ Khoa Hết Bao Nhiêu Tiền 2022 (Giá Niêm Yết)
  • Phương Pháp Real Time Pcr Với Kit Iiq

    --- Bài mới hơn ---

  • Nguyên Tắc Real Time Pcr
  • Kiểm Nghiệm Salmonella Bằng Phương Pháp Real
  • Xét Nghiệm Phát Hiện Bệnh Lậu Bằng Phương Pháp Pcr
  • Các Quy Trình Xét Nghiệm Chẩn Đoán
  • Máy Pcr Là Gì? Các Loại Máy Pcr Trong Chăn Nuôi
  • Trong bài viết này, HappyVet sẽ hướng dẫn phương pháp Real Time PCR với kit iiQ-POCKIT cho bạn đọc ứng dụng một cách chính xác nhất.

    – Heo: Mẫu máu hoặc mẫu mô tùy vào từng bệnh và sự phân bố của virus trong từng cơ quan.

    – Gà: Swab khí quản hoặc mẫu mô.

    – Đối với tất cả các mẫu: nếu sử dụng trong ngày bảo quản ở tủ lạnh 4 oC, nếu để qua đêm hoặc thời gian dài thì bảo quản ở tủ -20 o C

    – Mẫu máu bảo quản trong ống chống đông EDTA

    – Đối với DNA sau khi tách chiết xong phải sử dụng luôn nếu không phải bảo quản ngay trong tủ lạnh 4 o C.

    – Đối với đối chứng dương P+ của kit: bảo quản ở tủ lạnh 4 o C, nếu sử dụng ngay sau khi hoàn nguyên để 5 phút để chất phân rã.

    – DNA nếu lưu lại mẫu và sử dụng cho lần sau cần bảo quản tủ -20 oC (6 tháng), ARN phải bảo quản -80 oC (6 tháng) trường hợp không có tủ -80 oC thì bảo quản ở tủ -20 o C (1 tháng)

    – Hút máu tĩnh mạch trên heo và bảo quản trong ống chống đông

    – Gà: Lấy que lấy mẫu dịch swab khí quản của gà và cho vào ống eppendorf 1,5ml chứa 500ml PBS. Mổ khám lấy mẫu mô, nơi mầm bệnh khu trú nhiều nhất (tùy vào từng bệnh)

    Kit iiQ-POCKIT:

    – 1 bộ kit gồm 48 test, dạng đông khô, để bảo quản và vận chuyển dễ dàng tránh bị biến tính

    – Chuẩn bị: hoàn nguyên Kit bằng dung dịch buffer pmix đã có sẵn.

    Hút 50µl dung dịch buffer pmix cho vào kit, votex nhẹ rồi ly tâm (votex: trong vòng 5-8s, nhẹ chậm và tránh bọt khí)

    Chuẩn bị ống PCR trong phòng master mix

    Chuẩn bị Kit vào trong ống PCR: hút 23µl dung dịch kit + 2µl DNA đã tách chiết.

    Pha chuẩn dương: mỗi bộ kit có một chuẩn dương, hệ số 104, pha loãng 10 lần, lấy 27µl dung dịch tARN + 3µl chuẩn dương.

    Mỗi bộ Kit chỉ cần làm đường chuẩn 1 lần.

    FAM và VIC cho kit iiQ-POCKIT cho quá trình chạy PCR

    FAM là kết quả chạy chẩn đoán của mẫu, VIC là kết quả chạy đối chứng nội chuẩn

    Hiệu quả phản ứng: 95% ~ 105%

    Y là số ct or cq (số chu kỳ phản ứng bắt đầu), a là b là

    --- Bài cũ hơn ---

  • Xét Nghiệm Pcr Trong Chẩn Đoán Y Khoa
  • Những Điều Bạn Cần Biết Về Xét Nghiệm Pcr Hiv Hiện Nay!
  • Công Ty Hùng Phát Tặng Tỉnh Lâm Đồng Máy Xét Nghiệm Covid
  • : Điều Trị Viêm Âm Đạo Hết Bao Nhiêu Tiền?
  • Chi Phí Chữa Trị Bệnh Đau Bụng Kinh Ở Biên Hòa Giá Bao Nhiêu?
  • Sự Khác Biệt Giữa Pcr Sao Chép Ngược Và Pcr Thời Gian Thực Là Gì? Họ Có Giống Nhau Không?

    --- Bài mới hơn ---

  • Sự Khác Biệt Giữa Thời Tiết Và Khí Hậu Là Gì?
  • Phân Biệt Giữa Kiểm Tra Và Thanh Tra Thuế
  • Mối Quan Hệ Và Sự Khác Biệt Giữa Hoạt Động Thanh Tra Và Kiểm Tra, Giám Sát
  • Phân Biệt Giữa Thanh Tra Và Kiểm Tra Trong Hoạt Động Quản Lý Nhà Nước
  • Mối Quan Hệ Giữa Triết Học Và Khoa Học
  • Sự khác biệt giữa PCR sao chép ngược và PCR thời gian thực là gì? Họ có giống nhau không?

    Họ rất nhiều không giống nhau. Nhưng tôi hiểu câu hỏi đến từ đâu: cả hai có thể được viết tắt là RT- PCR. Reverse transcriptase xuất hiện đầu tiên, sau đó Real-Time đã đánh cắp từ viết tắt.

    PCR phiên mã ngược (RT-PCR):

    Mẫu: RNA.

    Enzyme: Phiên mã ngược.

    Sản phẩm cuối: dimer DNA-RNA.

    Được sử dụng để tạo mẫu DNA từ RNA cho phản ứng PCR tiếp theo. Sẽ không khuếch đại mẫu, chỉ để chuẩn bị mẫu DNA để khuếch đại. Sẽ được theo sau bởi phản ứng khuếch đại PCR (có thể bằng PCR thời gian thực hoặc thông thường).

    PCR thời gian thực (RT-PCR):

    Bản mẫu: DNA

    Enzyme: DNA polymerase

    Sản phẩm cuối: DNA

    Mục đích: đo lường sự khuếch đại của DNA trong quá trình. Là một phần của thẻ huỳnh quang hỗn hợp phản ứng được thêm vào. Tín hiệu huỳnh quang phát ra khi được kết hợp trong chuỗi xoắn DNA sợi đôi như một sản phẩm PCR. Sau mỗi chu kỳ PCR, huỳnh quang được kiểm tra và so sánh với phản ứng kiểm soát dương tính. Do đó, số lượng DNA có thể được đo sau mỗi chu kỳ (theo thời gian thực). Phản ứng PCR thông thường không cho phép – bạn đo lượng DNA sau khi kết thúc phản ứng.

    Real-Time PCR là một công cụ rất hữu ích khi bạn muốn đo lường hiệu quả của phản ứng PCR. Hiệu quả giảm sau khi đạt được nồng độ nhất định và các chu kỳ sau không đạt được hiệu quả. Ngoài ra, điện di gel agarose sau đó có thể không cần thiết với PCR thời gian thực.

    Quá trình có thể có nhược điểm, mặc dù:

      Nó đắt hơn nhiều. Nó đòi hỏi phải có trang bị chuyên dụng. Sản phẩm này có thể không phù hợp với các ứng dụng tiếp theo như nhân bản.

    Nhưng này, bạn nhận được một câu trả lời định lượng ngay lập tức!

    Điều đầu tiên, bộ não sẽ dễ dàng phân biệt hơn nếu chúng ta đề cập đến transcriptase-PCR ngược là rtPCR và gọi PCR thời gian thực là PCR định lượng (qPCR).

    rtPCR về cơ bản bắt đầu bằng cách tạo DNA bổ sung (cDNA) từ mRNA. Để làm điều này, enzyme phiên mã ngược được yêu cầu. Phiên mã ngược tương tự như DNA polymerase, chỉ có nó đọc RNA để sắp xếp chuỗi bổ sung DNA chuỗi đơn. RNase H là một endonuclease phải được thêm vào để loại bỏ RNA khỏi chuỗi cDNA. Từ thời điểm này, DNA polymerase 1 được thêm vào, và PCR bình thường xảy ra để tạo ra một chuỗi DNA khác bổ sung cho cDNA.

    qPCR, đối với hầu hết các phần, giống như PCR và rtPCR thông thường. Sự khác biệt là qPCR sử dụng các phương pháp định lượng như ghi nhãn huỳnh quang để theo dõi quá trình sản xuất DNA trong thời gian thực của Hồi, tên vì thế. rt-qPCR là một quá trình trong đó DNA được tổng hợp từ mRNA, nhưng thuốc nhuộm huỳnh quang hoặc đầu dò được thêm vào cho mỗi chu kỳ tổng hợp DNA. Ý tưởng chung là sự phát triển mạnh mẽ khi nhiều DNA được tổng hợp.

    Điều thú vị về việc tạo cDNA từ mRNA là DNA đủ ổn định để được nối vào một vec tơ tiêu hóa, sau đó có thể được chuyển thành tế bào chủ. Sau đó, tế bào chủ có thể biểu thị sản phẩm của gen mục tiêu.

    Điều đầu tiên, bộ não sẽ dễ dàng phân biệt hơn nếu chúng ta đề cập đến transcriptase-PCR ngược là rtPCR và gọi PCR thời gian thực là PCR định lượng (qPCR).

    rtPCR về cơ bản bắt đầu bằng cách tạo DNA bổ sung (cDNA) từ mRNA. Để làm điều này, enzyme phiên mã ngược được yêu cầu. Phiên mã ngược tương tự như DNA polymerase, chỉ có nó đọc RNA để sắp xếp chuỗi bổ sung DNA chuỗi đơn. RNase H là một endonuclease phải được thêm vào để loại bỏ RNA khỏi chuỗi cDNA. Từ thời điểm này, DNA polymerase 1 được thêm vào, và PCR bình thường xảy ra để tạo ra một chuỗi DNA khác bổ sung cho cDNA.

    qPCR, đối với hầu hết các phần, giống như PCR và rtPCR thông thường. Sự khác biệt là qPCR sử dụng các phương pháp định lượng như ghi nhãn huỳnh quang để theo dõi quá trình sản xuất DNA trong thời gian thực của Hồi, tên vì thế. rt-qPCR là một quá trình trong đó DNA được tổng hợp từ mRNA, nhưng thuốc nhuộm huỳnh quang hoặc đầu dò được thêm vào cho mỗi chu kỳ tổng hợp DNA. Ý tưởng chung là sự phát triển mạnh mẽ khi nhiều DNA được tổng hợp.

    Điều thú vị về việc tạo cDNA từ mRNA là DNA đủ ổn định để được nối vào một vec tơ tiêu hóa, sau đó có thể được chuyển thành tế bào chủ. Sau đó, tế bào chủ có thể biểu thị sản phẩm của gen mục tiêu.

    svcministry.org © 2022

    --- Bài cũ hơn ---

  • Sự Khác Biệt Giữa Nhu Cầu Và Mong Muốn
  • Sự Khác Biệt Giữa Nhu Cầu Và Muốn
  • Sự Khác Nhau Giữa Cưa Gỗ Và Cưa Kim Loại
  • Fob Là Gì? So Sánh Fob Với Các Hình Thức Vận Tải Cir, Cfr, Fas
  • Sự Khác Biệt Giữa Máy Lạnh Và Máy Điều Hòa
  • Web hay
  • Links hay
  • Push
  • Chủ đề top 10
  • Chủ đề top 20
  • Chủ đề top 30
  • Chủ đề top 40
  • Chủ đề top 50
  • Chủ đề top 60
  • Chủ đề top 70
  • Chủ đề top 80
  • Chủ đề top 90
  • Chủ đề top 100
  • Bài viết top 10
  • Bài viết top 20
  • Bài viết top 30
  • Bài viết top 40
  • Bài viết top 50
  • Bài viết top 60
  • Bài viết top 70
  • Bài viết top 80
  • Bài viết top 90
  • Bài viết top 100